Histological and immunohistochemical evaluation of two cell therapy protocols in equine suspensory ligament repair / Avaliação histológica e imunoistoquímica do reparo do ligamento suspensório equino tratado com dois protocolos de terapia celular

This study aimed to histologically evaluate the quality of tissue repair in equine suspensory ligament treated with two cell therapy protocols. All four limbs of six animals were operated simultaneously to remove a fragment in each ligament using a skin biopsy punch. Two days later, intralesional injections were performed using bone marrow mononuclear fraction (BM group), cultivated cells derived from adipose tissue (AT group), saline (positive control group), or no treatment (negative control group), in such way that each horse received all treatments. After sixty days biopsies were performed for histological analysis (H & E, Masson's trichrome and picrosirius red) and immunohistochemistry analysis (collagen type III). Histological findings (H & E and Masson's trichrome), birefringence intensity (through picrosirius) and collagen type III expression (through immunohistochemistry) were analyzed. Samples from treated groups had better birefringence intensity (P=0.007) and fiber alignment scores were superior compared to controls, though not statistically significant (P=0.08). Presence of inflammatory cells and intense staining for collagen type III occurred in all groups demonstrating an active healing process. In conclusion, both protocols resulted in improvement of tissue repair indicating their potential to be used as an adjuvant treatment of equine suspensory ligament disorders.(AU)

Este estudo teve como objetivo a avaliação histológica e imunoistoquímica do reparo do ligamento suspensório equino tratado com dois protocolos de terapia celular. Os quatro membros dos seis animais do experimento foram submetidos a procedimento cirúrgico em que um fragmento de cada ligamento foi retirado, utilizando-se punch de biópsia. Dois dias após o procedimento, aplicações intralesionais foram realizadas, por meio de aspirado de medula óssea (bone marrow-BM), células mesenquimais derivadas de tecido adiposo (adipose tissue-AT), solução salina (positive control group-PC) ou controle (negative control-NC). Após 60 dias, biópsias foram retiradas da região de reparo dos ligamentos e foram submetidas à análise histológica (HE, tricrômio de Masson, picrosírius red) e imunoistoquímica (colágeno tipo III). Diferentes variáveis histológicas (HE e tricrômio de Masson), a intensidade de birrefringência das fibras colágenas (picrosírius red) e a expressão de colágeno tipo III foram avaliadas. Os grupos tratados apresentaram maior birrefringência (P=0,007) e alinhamento de fibras (P=0,08) comparados ao controle, para o qual o resultado não se mostrou estatisticamente significativo. Achados histológicos e imunoistoquímicos demonstraram um processo ativo de reparo tecidual em todos os grupos. Concluiu-se que os dois protocolos de terapia celular apresentaram melhora no reparo tecidual, demonstrando potencial terapêutico adjuvante no tratamento de afecções do ligamento suspensório equino.(AU)

Modelo de indução de lesão no ligamento suspensório equino com utilização de punch para biópsia cutânea / Suspensory ligament lesion model in horses using a skin biopsy punch

O objetivo deste estudo foi avaliar um novo modelo de lesão no ligamento suspensório (LS). Sob anestesia geral, um punch para biópsia cutânea de 0,6cm de diâmetro foi utilizado para criar uma lesão no centro do LS de ambos os membros torácicos e pélvicos, em seis equinos. Todos os animais se recuperam da cirurgia sem nenhuma complicação importante. Realizaram-se avaliações clínicas e ultrassonográficas no período pós-operatório. Durante as primeiras duas semanas, no local da lesão, houve redução no edema de leve para discreto e da dor de discreta para ausente. As lesões foram facilmente observadas ao exame ultrassonográfico 72 horas após a cirurgia como áreas anecoicas homogêneas, representando uma média (± erro padrão) de 33,5±5 por cento da área do LS. Não houve alteração significativa na área de lesão durante as primeiras duas semanas (P=0,77). Concluiu-se que o modelo proposto foi eficiente para promover lesões controladas e homogêneas simultaneamente nos quatro LS, sem causar desconforto importante aos equinos. Esses achados, associados à possibilidade de se avaliar previamente o LS por meio de biópsia, demonstram que esse modelo de indução de lesões ligamentosas se apresenta com um método útil, principalmente se aplicado ao estudo de terapias destinadas a melhorar o processo de reparo do LS.

The aim was to study a novel model of suspensory ligament (SL) lesion. Under general anesthesia, a punch for skin biopsy (0.6cm of diameter) was used to create a circular lesion in the middle of SL simultaneously in the four members of six horses. All horses recovered without any important complication. Clinical and ultrasonographic evaluations were made during the post operative period. During the first two weeks, edema changed from mild to discreet, and pain changed from discreet to none around the surgical site. The lesions were easily observed by ultrasonography 48h after surgery as a homogenous anechoic area representing a mean (± SEM) 33.5±5 percent of the SL area, and did not change size during the first two weeks (P=0.77). In conclusion, the proposed model was efficient to promote controlled and homogeneous lesions in the four SL simultaneously without causing important discomfort to the horses. Taking in account these findings together with the possibility of evaluation of the ligament biopsy previously to any treatment, this method may be useful especially in studies testing therapies for tissue repair.

Ligamento suspensório da articulação metacarpo/metatarso falangianas nos eqüinos: aspectos evolutivos, anatômicos, histofisiológicos e das afecções / Suspensory ligament of equine metacarpus/metatarsus falangeal joint: evolutive anatomical, histophysiological aspects and pathologies

Esta revisão reúne e discute aspectos anatômicos, histofisiológicos e afecções do ligamento suspensório (LS) da articulação metacarpo/metatarso falangiana dos eqüinos. Considerou-se a importância desses aspectos para subsidiar o diagnóstico e o tratamento de afecções no LS, visto que freqüentemente animais portadores dessas doenças permanecem em atividades sob efeito de tratamentos paliativos que, apesar de proporcionarem alívio álgico, quase sempre não garantem a cura definitiva e, por conseguinte, não garantem o bem-estar absoluto do animal.

This review discusses anatomical, histophysiological and pathological aspects of the suspensory ligament (SL) of metacarpal/metatarsal joint in the horse. This knowledge is important to aid in diagnosing and treating the SL diseases in the athlete horses, considering that affected animals remain on training activities under palliative treatments that insure pain relieve, but do not guarantee fully and definitively welfare of the horses.